支原体污染对细胞培养造成各种有害影响，成为细胞培养过程中的一个重要问题。保守估计，常规细胞培养中的污染率在15%到35%之间，大大降低了实验结果的可信度。因此，定期检测和根除支原体对于确保细胞培养系统中不存在支原体并获得准确可靠的实验数据至关重要。经过多次实验验证，Arcegen推出了一种全面的支原体清除解决方案。

支原体是什么？

支原体(Mycoplasma)，迄今发现的最小和最简单的原核生物，直径为0.1-0.3 μm。它们可以很容易地通过过滤器并污染培养系统，表现出高度的多形性，具有多种形式，如球形、杆状、丝状和分支状。

Figure 1. Morphology and Characteristics of Mycoplasma

支原体污染的后果

由细菌和真菌引起的污染相对容易检测、预防和清除。然而，由支原体引起的污染难以检测；即使当生长密度达到10⁷-10⁹ CFU/毫升时，通常也没有可见的污染迹象(如浊度、pH值变化等)。).

Figure 2. Changes in Cellular States Associated with Mycoplasma Contamination

支原体污染的来源

1.细胞间的交叉污染。

2.工作环境或实验室设备的污染。

3.实验者的无菌技术差。

4.培养基或其他试剂的污染。

5.用于细胞制备的原始组织或器官的污染。

细胞培养出现支原体污染怎么办？

Figure 3. Comprehensive Solution for Mycoplasma Contamination

细胞培养中支原体污染的解决方案

1. 支原体检测

1）One-step Isothermal Mycoplasma Detection一步法恒温支原体检测

Arcegen的一步等温支原体检测试剂盒利用独特的等温扩增技术，具有更强的颜色辨别能力，从蓝紫色(阴性)过渡到天蓝色(阳性)，便于视觉识别。它包括额外的防污染组件，以消除假阳性结果。

Figure 4. Workflow of One-step Mycoplasma Detection Procedure

2）PCR技术的支原体检测

Arcegen基于PCR的支原体检测方法与传统的一步PCR检测方法不同，它将引物对的数量从1个增加到3个，目标是支原体16S和23S rRNA的保守区域。这种巢式PCR扩增提高了灵敏度，同时减少了非特异性扩增，允许以低至单个拷贝的水平检测支原体。

Figure 5. Gel Electrophoresis Image of PCR Amplification with Mycoplasma Samples of Different Concentrations

Table1. Types of Mycoplasma Detectable by Arcegen One-Step Isothermal Mycoplasma Detection Kit

[Note]The blue portion indicates the same mycoplasma species detectable by both the one-step isothermal detection and PCR detection methods.

2. DfCell Mycoplasma Removal Reagent (1000×) DfCell支原体去除试剂

DfCell支原体清除试剂(1000×)是一种混合制剂，通过抑制DNA和支原体生长所需蛋白质的合成来实现有效的支原体清除，而不会对细胞造成伤害。它旨在最大程度地拯救您的细胞，并将支原体污染造成的损失降至最低。

Figure 6. Demonstration of Cell Removal Effectiveness

• 支原体去除试剂产品优势：

低毒性：对细胞的毒性最小，不影响随后的细胞实验，如细胞活力测定和细胞转染。

稳定性强：试剂可在-20°C下长时间储存，同时保持高效。

操作简单：只需将产品加入被支原体污染的培养基中，孵育即可。

快速作用：“立即生效”，在短短3天内就能看到效果。

去除范围广：能够去除实验室常见的大多数支原体类型。

Figure 7. Illustration of Cell Toxicity Detection of DfCell Mycoplasma Removal Reagent

3.预防支原体污染

常见问题

问:如何检测新鲜培养基是否被支原体污染？

答:将新鲜培养基在CO2培养箱中培养48小时(样本)，然后收集一定量的上清液用于测试。如果样本变成天蓝色或显示PCR扩增带，则表明支原体污染。

问:为什么同一样本在一步恒温检测试剂盒中结果显示为阳性，而在PCR检测中却为阴性？

答:一步恒温检测试剂盒检测27种支原体，而PCR检测只检测12种常见类型。样本中的支原体污染可能不包括在PCR检测的种类中。

问:为什么对于同一份样本，PCR结果显示为阳性，而一步恒温检测试剂盒结果为阴性？

答:PCR的灵敏度高于一步恒温法，因为它可以检测单个拷贝的支原体，而一步法需要10³个拷贝。

问:巢式PCR和一步恒温检测试剂盒哪个更好？

答:客户可以根据他们的实验需求选择合适的产品，或者他们可以结合使用这两种方法来识别支原体污染。

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