RAW264.7细胞，也被称为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，常被用作研究巨噬细胞功能和生物学特性的模型，细胞可表现出与原发性巨噬细胞相似的功能。因此，RAW264.7细胞在多个研究领域中都有广泛的应用：

                     Raw264.7细胞20X展示图（启达生物:CD0168）

1. **骨骼疾病研究**：RAW264.7细胞在体外可以对刺激产生反应，并随后产生具有破骨细胞完全分化的特征的多核细胞。因此，它被广泛用于研究骨骼疾病，如风湿性关节炎、骨质疏松症、骨质溶解、牙周炎等。RAW264.7已被证明在RANKL诱导下容易分化为破骨细胞，使其成为破骨细胞生成研究的常用体外模型。

2. **炎症研究**：RAW264.7细胞也是筛选抗炎活性物和研究炎症最常用的体外研究模型。在诱导剂（如脂多糖LPS）的作用下，RAW264.7细胞会模拟炎症反应，释放或上调多种炎症介质，如一氧化氮（NO）、环氧合酶-2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等。这使得RAW264.7细胞成为研究炎症过程和开发抗炎药物的宝贵工具。

3. **免疫学研究**：RAW264.7细胞还可以用于研究各种刺激物（如细菌、病毒、寄生虫、细胞因子等）对巨噬细胞的影响，以及巨噬细胞在免疫反应中的作用。

4. **药物筛选和毒理学研究**：RAW264.7细胞也被广泛用于药物筛选和毒理学研究，以评估药物对巨噬细胞功能和生存能力的影响。

Raw264.7如何诱导成破骨细胞呢？

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破骨细胞诱导和检测步骤

1. RAW264.7 细胞培养与接种的密度和梯度稀密会导致RAW264.7细胞生长迅速且容易分化，而状态较好的RAW264.7细胞是诱导破骨细胞的关键。

,细胞复苏后直到密度到90%以上并且换液后第二天发现培养基泛黄，立即终止细胞培养并开始传代，使用瓶内发黄的培养基先轻轻吹打细胞，之后再用PBS吹打一次即可完全收集细胞，若瓶内还贴有不是椭圆形的细胞，一般弃之不用，因为这些raw264.7已经分化，不适合破骨诱导了。

2. RAW 264.7细胞生长较快，且诱导需要4天,诱导前密度梯度培养4天,将RAW264.7细胞按(0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50)x10 ^4/cm²”的密度接种到24孔板中，培养4天后用1%的甲苯胺蓝染色观察细胞生长状态，找出RAW264.7细胞的最佳诱导密度。

3-1： TRAP 染色:根据密度梯度培养结果将RAW264.7细胞以5x10^3/cm²的密度接种到48孔板中,用50ng/ml的高浓度RANKL诱导破骨细胞，并于24、48、72、96小时分别进行TRAP染色，观察破骨细胞形态变化。同样密度将RAW264.7细胞接种到48孔板中，设置对照组与不同RANKL浓度诱导组，过夜贴壁后，对照组正常培养，未加任何处理，诱导组分别加用5、10、20、50ng/mI的RANKL诱导破骨细胞，每2天换液。4天后镜下观察到融合的破骨细胞取出48孔板，去除培养液，进行 TRAP 染色；

                         Raw264.7TRAP 染色，分别是4X,10X,100X拍摄

3-2:破骨细胞吸收功能检测实验 RAW264.7细胞以5x10^3/cm²的密度接种于24孔骨细胞培养板中，设立对照组与诱导组，对照组正常培养，未加任何处理，诱导组加20ng/ml的RANKL诱导破骨细胞，换液2天/次，诱导4天后拿出骨细胞培养板，移除培养液，dd水洗第1遍，加人4%的次氯酸钠漂洗5min,移除次氯酸钠，用dd水冲洗第2遍，加人1%的甲苯胺蓝染色10min后，dd水洗第3遍，室温晾干，光镜下进行观察拍照。

             RAW264.7诱导成破骨细胞的甲苯胺蓝染色

3-3：骨吸收实验：RAW264.7细胞经诱导4天后骨细胞培养板上出现大量的圆形、椭圆形、不规则形状的白色吸收瘢痕，对照组未见吸收瘢痕

                     对照组                                                诱导组

Raw264.7细胞炎症模型构建

构建炎症模型对RAW264.7细胞的形态没有要求，终于不用在乎细胞是否长角了

1.细胞铺板:以96孔板为例，选择生长状况良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7消化，离心后重悬计数，选择合适的细胞浓度稀释(2~3x10^4/孔)

2、铺板:将重悬好的细胞液倒入加样槽中，吹打细胞，混匀加样，每孔加入100 ul，2~3列加样后重新吹打均匀(细胞易沉降)，边缘孔每孔加入100ulPBS.

3、放入细胞培养箱，5 % CO2、37'C条件下继续培养过夜

4、配药:样品A，配制10 mg/mL溶于1 mL无菌水;样品：B.C，配制10mg/mL溶于1ml DMSO，分别用高糖DMEM(含10%FBS)稀释成不同浓度(0.2、0.5、5.0、1.0和10ug/mL)

5、将96孔板过夜培养后将完全培养液倒出，按设置的浓度梯度加药，每个浓度设置3个重复样，培养 24 h。

6、将已加药培养过夜(加药时细胞接近平铺满孔底)的 96 孔板中培养基吸出，每个孔中加入50 μL亚甲基蓝染液。

7、放入细胞培养箱孵育 1小时后取出，洗去亚甲基蓝染色液。

8、测 OD 值:每孔加100ul洗脱液，培养液震荡15 min，放入酶标仪，继续.荡3 min后595 nm 波长读数。

9分析数据，需要先得出对照组的平均值，各个实验数据/对照平均值x100%得出细胞存活率，算出各个数值之间的偏差，分析。

                     不同质量浓度脂多糖对RAW264.7细胞活力的影响

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