客户：“你们发的293T细胞到货全是飘的！”客户很生气，我们很无奈，可以看下图片对比：
为什么细胞到客户手上就飘起呢？
首先我们需要剖析这个细胞的特性。
1、消化方式：293T细胞是一个贴壁能力较弱的细胞，一般在传代过程中0.25%胰酶含edta常温消化30秒就可以全部消化下来了。
2、传代比例：这个细胞生长速度较快倍增时间一般是24小时左右，长得比较快，所以传代比例可以达到1:4左右。
3、生长特性：贴壁生长，随着细胞汇合度增加细胞会连片生长，当密度高于80%-90%细胞会由于生长空间受限成片飘起。所以需要仔细把握细胞生长密度。
4、培养体系：DMEM高糖＋10% FBS+1% P/S
根据细胞的特性总结下来，293T细胞不贴壁的原因可能有以下几点：
1、细胞特性：293T细胞是一种贴壁依赖型细胞，但其贴壁能力较弱，容易在培养过程中脱落。这种特性使得在操作过程中需要特别小心，避免液体直接冲击细胞。
2、 培养条件：293T细胞对培养条件非常敏感，例如DMEM中碳酸氢钠浓度和培养箱中的CO2浓度需要严格控制。如果这些条件不适宜，可能导致细胞贴壁性变差。
3、血清批次差异：不同批次的胎牛血清（FBS）成分差异可能导致细胞贴壁性变差，建议使用相同批次的血清以减少这种影响。
4、 消化操作不当：胰酶消化时间过长或吹打动作过猛会导致细胞受伤，进而影响细胞的贴壁能力。建议控制消化时间和轻柔吹打，以达到80%的融合率。
5、空间隔离：当293T细胞从大瓶转移到小孔板时，由于空间隔离导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度降低，不利于细胞的贴壁或增殖。解决办法是在铺板前对孔板进行明胶包被处理。
6、传代次数过多：随着传代次数的增加，293T细胞的生长状态会逐渐下降，出现贴壁不牢的现象。因此，需要及时冻存细胞并保持实验的稳定性和持续性。
293T细胞不贴壁的原因可能涉及细胞特性、培养条件、血清批次差异、消化操作不当以及传代次数过多等多个方面。通过优化这些因素，可以改善293T细胞的贴壁性。
如何改善细胞到货不贴壁情况呢？
1、细胞到货后现在培养箱里稳定3-4小时，让细胞适应新的培养环境。
2、稳定后发现细胞还有大量飘起，建议将培养液全部收集起来离心收集细胞，打入原瓶静置培养，这一步操作时需要注意一下轻柔的将细胞吹散成单个细胞。
3、重铺静置培养一天后观察贴壁情况，将还没有贴上的细胞再换液时扔掉。