一种以微观方式标记抗体的试剂盒-ReadiLink™抗体标记试剂盒
作者:西安百萤生物科技有限公司 2019-01-18T10:32 (访问量:3599)
法。 该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。试剂盒中使用的
iFluor TM和 mFluor TM染料的琥珀酰亚胺酯(SE)显示出与蛋白质的脂族
胺的良好反应性和选择性,并形成羧酰胺键,其与天然肽键相同且稳定。
iFluor TM 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色,荧光原位杂交,流式
细胞术和其他生物学应用。 每个 ReadiLink™Rapid 抗体标记试剂盒都提供了
进行两次偶联反应(2x50μg 蛋白质)的所有必需成分。 每个试剂盒可用于
标记 50-100μg 单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),只需两个
简单的混合步骤
Readilink™快速试剂盒标记原理
1.通过在反应缓冲液(pH 7.5-8.5)中将标记染料与蛋白质(待标记的)混合,
开始标记反应。
2.孵育得到所需蛋白质缀合物和非反应性游离染料的混合物。
3.通过将非荧光 Tide Quencher
TM(TQ)染料与反应溶液混合来淬灭反应。 TQ 染料阻止反应并将非反应性自由
标记染料转化为非荧光 TQ 标记染料复合物,这消除了游离标记染料的背景荧光干扰。
试剂盒组成
Components Amount Storage
Component A:Mitolite™Red 2 vial (one vial is for 50 ug protein) —20℃
Component B:Live Cell Staining Buffer 1 vial (20uL) —20℃
Component C:TQ™-Dyed Quench Buffer 1 vial (20uL) —20℃
标准操作规程(标记 50μg 蛋白质)
将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶
液。 以下 SOP 是标记抗 HDAC IgG 抗体的实例。
1.准备蛋白质溶液(溶液 A):
为了标记 50μg 蛋白质(假设目标蛋白质浓度为 1 mg / mL),将 5μL(总反应体
积的 10%)反应缓冲液(组分 B)与 50μL 目标蛋白质溶液混合。
注 1.如果蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg 蛋白质可用于标记
反应。
注 2:为了标记 100μg 蛋白质(假设目标蛋白质浓度为 1 mg / mL),将 10μL
(总反应体积的 10%)反应缓冲液(组分 B)与 100μL 目标蛋白质溶液混合。
注 3:蛋白质应溶解于 pH7.2-7.4 的 1X 磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解
在甘氨酸缓冲液中,必须用 1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用 Amicon Ultra- 0.5,
Ultracel-10 膜,10 kDa(来自 Millipore 的 cat#UFC501008)去除游离胺或铵
盐(如硫酸铵和乙酸铵)。
注 4:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注 5:如果蛋白质浓度低于 1 mg / mL,结合效率会显著降低。为获得最佳标记效
率,建议最终蛋白质浓度范围为 1-2 mg / mL。
2.运行结合反应:
2.1 将蛋白质溶液(溶液 A)加入一小瓶标记染料(组分 A)中,通过反复移液几
次将其充分混合,或将小瓶涡旋几秒钟。
注意:使用标记染料的两个小瓶(组分 A)通过将 100μg 蛋白质分成 2x50μg 蛋
白质并使每个 50μg 蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记 100μg 蛋白质。 将两个
小瓶合并用于下一步。
2.2 将缀合反应混合物在室温下保持 30-60 分钟。
注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
3.停止共轭反应:
3.1 加入 5uL(50μg 蛋白质)或 10μL(100μg 蛋白质),这是 TQ 染色猝灭缓冲
液(组分 C)总反应体积的 10%到共轭反应混合物中(来自步骤 2.2),混合。
3.2 在室温下孵育 10 分钟。
3.3 使用标记的蛋白质(抗体)。 蛋白质共轭物的储存
蛋白质缀合物应在载体蛋白(例如 0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5mg / mL 储
存。 为了更长时间的储存,可以将蛋白质缀合物冻干或分成单次使用的等分试样
并在≤-20℃下储存。
名称 货号 规格 价格
ReadiLink™ FITC 抗体标记试剂盒 1299 2 Labelings 1740
ReadiLink™RPE 抗体标记试剂盒 1310 2 Labelings 5940
ReadiLink™APC 抗体标记试剂盒 1311 2 Labelings 5940
ReadiLink™PerCP 抗体标记试剂盒 1312 2 Labelings 3540
ReadiLink™ Cy7 抗体标记试剂盒 1294 2 Labelings 1740
ReadiLink™ mFluor™620 抗体标记试剂盒 1123 2 Labelings 1740
ReadiLink™ iFluor™488 抗体标记试剂盒 1255 2 Labelings 1740
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